液相色谱的组成有哪些？

        


　　很多朋友在买液相色谱之前都会有一些疑问。这种仪器是如何组成的？品牌之间有哪些区别吗？答案是肯定的，但结果是一样的原理。一套液相色谱系统大致分为五个部分：流动相预处理部分、输注部分、进样部分、分离部分和检测部分。液相色谱系统由储液器、泵、注射器、色谱柱、检测器和记录器组成。液相色谱仪的主要系统分为进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统。主要是了解这些系统的优点和特点。
           
          
　　液相色谱仪的组成：

　一、输液系统

　　包括溶剂柜、真空脱气器、溶剂混合器、高压泵等，核心部分为泵；泵的功能是为流动相通过紧密填充的色谱柱提供足够的驱动力。

　　洗脱方法也分为两种：

　　(1)等体积洗脱：流动相组成在同一分析周期内保持不变，适用于组分少、性质差异小的样品。

　　(2)梯度洗脱：在分离过程中，采用两种(或两种以上)极性不同的溶剂，按照一定的程序连续改变流动相的浓度比和极性的一种洗脱方式。它用于分析成分多、性质差异大的复杂样品。


　   二、样品注入系统

　　分析样品被有效地送到色谱柱进行分离。一般有自动进样器和手动进样器，进样量应不少于回路体积的5-10倍(至少3倍)。


　   三、储液器

　　储槽是储存溶剂的装置。储液器中的溶剂必须非常纯，储液器的材料应耐腐蚀且对溶剂呈惰性。一般可以使用1-2升的大容量玻璃瓶或者不锈钢材质的容器。储液器应配备溶剂过滤器，以防止流动相中的颗粒进入泵中。溶剂过滤器一般由耐腐蚀的镍合金制成，孔径一般为2  m。


　　四、分离系统

　　主色谱柱是一根填充有填料的管子。色谱柱的材料有不锈钢、塑料、玻璃等。并且它们的尺寸(内径、长度)不同；柱填料主要包括硅胶基质和聚合物基质，填料的粒径不同。


　　五、梯度洗脱

　　梯度洗脱是在分离过程中通过逐渐改变流动相的组成来增加洗脱能力的方法。用梯度装置将两种或三种或四种溶剂按一定比例混合，进行二元或三元或四元梯度洗脱。一般用低压梯度洗脱，低压梯度是通过低压混合设计的。只需要一个高压泵就可以在常压下将两种或两种以上的溶剂按一定比例混合后由高压泵输出。梯度可以是线性的、指数的或阶梯式的。


　　六、色谱柱

　　色谱柱是整个色谱系统的心脏，其质量直接影响分离效果。一般来说，色谱柱通常由不锈钢管制成，柱的内壁必须光滑，否则内壁的纵向沟槽和表面孔隙也会造成谱带增宽。立柱接头的体积要尽量小，立柱长度一般为10 cm  ~25cm，内径为4 mm  ~5mm。如果使用直径为5m~10m的固定相颗粒，理论塔板可达5 104个/m，尺寸排阻柱的内径通常大于5mm，制备的柱会更大；为了减少溶剂的用量，可以使用内径为1mm，长度为30mm  ~75mm的微径柱。如果使用3m的颗粒，理论塔板数可达1 105个/m4.。


       七、 检测器

　　对检测器的要求：灵敏度高、重现性好、线性范围宽、死体积小、对温度和流量变化不敏感等。主要有紫外检测器、荧光检测器、差分检测器等。差分检测器是一种通用检测器，理论上可以检测几乎所有的化合物。其原理是基于含有样品的洗脱液和洗脱液之间的折光率差异。差分检测器受压力变化、温度变化和流动脉冲影响较大，不适合梯度洗脱。


　　八、脱气装置

　　脱气的目的是防止流动相从高压柱中流出，释放气泡进入检测器，使噪音无法正常检测。一般来说，氦气泡通常用于驱除流动相中的溶解气体。因为氦在各种液体中的溶解度极低，所以需要用氯气快速清洗溶剂几分钟，然后让氦以很小的流量流过溶剂。


　　九、高压泵

　　泵应耐压、耐腐蚀且密封良好。高压泵主要用于输送流动相，其压力一般为几兆帕到几十兆帕。液体的粘度比气体高100倍。同时，由于固定相颗粒极细，柱内压降大，为了保证一定的流速，流动相必须通过高压强制通过柱子。高压泵应无脉动或最小脉动，以确保输出流动相的恒定流速。同时，可以用脉动阻尼装置消除脉动，使流动相的流量变化范围不超过2%~3%。高压泵主要分为三大类：恒压泵、恒流泵和螺杆泵。


　　十、进样器

　　高压进样阀广泛应用于液相色谱仪进样器，通过微量进样器将样品注入样品回路。所用的样品环有不同的尺寸，可根据分析要求选择。当进样阀的手柄置于吸入位置时，流动相通过孔的通道直接流向色谱柱，样品通过注射器从另一个位置进入样品环。如果样品过多，将从出口孔排出。然后将手柄转到进样位置，流动相会将样品带入色谱柱。